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全自動膜片鉗技術(shù)簡介

點擊次數(shù):7106 更新時間:2021-05-31

                                                                    全自動膜片鉗技術(shù)簡介

 

 

 

 

全自動膜片鉗技術(shù)(Automated patch clamp technique)的出現(xiàn)標(biāo)志著膜片鉗技術(shù)已經(jīng)發(fā)展到了一個嶄新階段,從這個意義上說,前面所講的膜片鉗技術(shù)我們稱之為傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)(Traditional patch clamp technique)。離子通道是藥物作用的重要靶點,膜片鉗技術(shù)被稱為研究離子通道的“金標(biāo)準(zhǔn)”。美國食品及藥物管理局(FDA)規(guī)定,非心臟類新藥必須有其對心臟hERG鉀通道是否抑制的膜片鉗研究結(jié)果,否則新藥不得用于臨床。
傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)每次只能記錄一個細(xì)胞(或一對細(xì)胞),對實驗人員來說是一項耗時耗力的工作,它不適合在藥物開發(fā)初期和中期進行大量化合物的篩選,也不適合需要記錄大量細(xì)胞的基礎(chǔ)實驗研究。全自動膜片鉗技術(shù)的出現(xiàn)在很大程度上解決了這些問題,它不僅通量高,一次能記錄幾個甚至幾十個細(xì)胞,而且從找細(xì)胞、形成封接、破膜等整個實驗操作實現(xiàn)了自動化,免除了這些操作的復(fù)雜與困難。這兩個優(yōu)點使得膜片鉗技術(shù)的工作效率大大提高了!
不同的全自動膜片鉗技術(shù)所采用的原理也不*相同,大體上有如下幾種:
 
1. Flip-Tip翻轉(zhuǎn)技術(shù):將一定密度的細(xì)胞懸液灌注在玻璃電極中,下降到電極的單個細(xì)胞通過在電極外施加負(fù)壓可以與玻璃電極形成穩(wěn)定的高阻封接,打破露在玻璃電極開口外的細(xì)胞膜就形成了全細(xì)胞記錄模式。德國Flyion公司的Flyscreen 8500系統(tǒng)采用的就是這一技術(shù),其通量zui高為6,即一次可同時記錄6個細(xì)胞。它的顯著特點是:(1)仍然采用玻璃毛坯作為電極;(2)藥物施加微量、快速。
 
2. SealChip技術(shù):*摒棄了玻璃電極,而是采用SealChip平面電極芯片,一定密度的細(xì)胞懸液灌注在芯片上面,隨機下降到芯片上約1-2μm的孔上并在自動負(fù)壓的吸引下形成高阻封接,打破孔下面的細(xì)胞膜形成全細(xì)胞記錄模式。采用這一技術(shù)的美國Axon(MDS)公司的PatchXpress 7000A系統(tǒng)是高通量全自動膜片鉗技術(shù)的*,是離子通道藥物研發(fā)的革命性工具,在國外實驗室和制藥廠廣泛用于hERG通道藥理學(xué)的研究。其通量zui高為16,即一次可同時記錄16個細(xì)胞。同時,其藥物施加微量、快速,不僅用于藥物篩選,還大量用于離子通道的基礎(chǔ)研究。
 
3. Population Patch Clamp技術(shù):同SealChip技術(shù)一樣,*摒棄了玻璃電極,而是采用PatchPlate平面電極芯片。該芯片含有多個小室,每個小室中含有很多1-2μm的封接孔。在記錄時,每個小室中封接成功的細(xì)胞數(shù)目較多,獲得的記錄是這些細(xì)胞通道電流的平均值。因此,不同小室其通道電流的一致性非常好,變異系數(shù)很小。美國Axon(MDS)公司采用這一技術(shù)研發(fā)出了全自動高通量的IonWorks Quattro系統(tǒng),成為藥物初期篩選的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
 
此外,同SealChip技術(shù)一樣采用平面電極芯片,但只含有一個封接孔的小型全自動膜片鉗設(shè)備也已經(jīng)問世。這種小型設(shè)備代替了顯微鏡、防震臺/屏蔽網(wǎng)和微操縱器,一次只記錄一個細(xì)胞。雖然通量不高,但是由于封接破、膜等過程為自動化,工作效率也有顯著提高。德國Nanion公司的Port-a-Patch就是這樣的全自動膜片鉗設(shè)備。
全自動膜片鉗技術(shù)采用的標(biāo)本必須是懸浮細(xì)胞,像腦片這類標(biāo)本無法采用。此外,全自動膜片鉗技術(shù)只能進行全細(xì)胞記錄模式、穿孔膜片鉗記錄模式以及細(xì)胞貼附式單通道記錄模式,而不能進行其他模式的記錄。
 
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